PCV2 ORF2/PPV VP2核酸疫苗的构建及猪IL2对其分子佐剂效应的研究

猪细小病毒(Porcine parvovirus, PPV)是引起猪繁殖障碍的重要病原之一。PCV2是猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,临床表现为进行性消瘦,皮肤苍白或黄疸。PPV和PCV2均为无囊膜DNA病毒,基因组较小,二者对分化快的组织如淋巴结均具很强的亲嗜性。PPV的感染能够刺激细胞进入细胞分裂的S期,从而促进了PCV2在细胞中的复制,使得PMWS的症状更加严重。如果能够有效地控制PCV2或/和PPV的感染,对于控制PMWS的发生具有及其重要的意义。有研究发现IL-2能通过多种环节促进T细胞的增殖、活化,并能刺激MHCⅡ类抗原等多种细胞表面分子的表达和多种细胞因子的产生,并已被广泛应用于DNA疫苗佐剂的研究中。 本研究将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因、PCV2 ORF2抗原多肽基因克隆到真核表达载体pCI-neo后构建真核表达质粒pCI-ORF2'-VP2,再通过基因柔性Linker将猪IL-2基因定向克隆到该载体,构建重组质粒pCI-IL-2-ORF2'-VP2。将阳性真核质粒转染PK15细胞,采用间接免疫荧光法和ELISA法检测其表达产物的免疫学活性。结果显示,所构建的真核质粒均能正常表达,且重组蛋白可分别与ORF2'/VP2多抗和PoIL-2蛋白抗血清发生特异性免疫反应。将真核质粒免疫BALA/c鼠,同时设立猪细小病毒灭活苗、猪圆环病毒亚单位苗和pCI空载体对照组,检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞的转化功能,外周血T淋巴细胞亚群的动态变化及血清PCV2、PPV抗体效价。结果显示,重组质粒免疫小鼠后均能刺激机体产生良好的免疫应答,且pCI-IL-2-ORF2'-VP2免疫小鼠脾脏淋巴细胞转化功能,CD4+、CD8+T淋巴细胞的数量和血清PPV/PCV2抗体的OD值在二免后均高于或显著高于猪细小病毒灭活苗组、猪圆环病毒亚单位苗组和pCI-ORF2'-VP2对照组。结果表明,猪IL-2作为细胞因子佐剂能显著增强VP2/ORF2'核酸疫苗诱导的免疫应答。研究结果为PPV和PCV2的新型基因重组疫苗的研究提供了数据参考。